コーンウォール（現在のイギリス南西部）のマルケ王のもとへ嫁ぐアイルランドの王女イゾルデと、彼女を護送する騎士トリスタン。トリスタンはイゾルデの婚約者を倒した仇でしたが、かつてイゾルデは瀕死の状態の彼を殺しきれずに助けたことがあり、敵同士ながらお互いに惹かれ合っていました。イゾルデは死を決意し、トリスタンに毒杯を勧めますが、侍女ブランゲーネがこれを「愛の妙薬」にすり替えてしまい、二人が杯を干した瞬間、抑圧されていた激しい愛が爆発します。やがて船はコーンウォールに到着し、歓迎のラッパが鳴り響きます。
深夜のマルケ王の城、狩りに出かけた王の留守にトリスタンに再会しようと、松明を消して合図しようとするイゾルデ。侍女ブランゲーネが、狩りの催し自体が罠であること、トリスタンの親友でもある王の家臣メーロトに気をつけるよう警告しますが、イゾルデは取り合いません。松明が消されるとトリスタンが登場し、二人は固く抱擁します。愛の陶酔に浸りながら、「昼」の理性を忌み嫌い、永遠に結ばれる「夜（死）」の世界を賛美する二人でしたが、そこへ王たちが戻り、二人の関係が露呈します。王の問いにトリスタンは応えず、イゾルデに「夜の国」に共に行ってくれるかと話しかけ、イゾルデもこれに応じます。怒りに燃えて切りかかるメーロトに身を投げ出したトリスタンは深手を負います。
瀕死のトリスタンは居城でイゾルデの到着を待ち焦がれています。ついにイゾルデが到着しますが、トリスタンはその腕の中で息絶えます。後を追ってきたマルケ王は二人のいきさつを知り、すべてを許そうとしますが、時すでに遅く、イゾルデもまたトリスタンの遺体に寄り添い、至福の中で愛の死を迎えます。